Лазерная сканирующая флуоресцентная микроскопия

Возможности созданных в ИПФ РАН установок для флуоресцентного имиджинга существенно дополняются комплексом лазерной сканирующей флуоресцентной микроскопии Carl Zeiss LSM 510 META NLO, размещенным в лаборатории биофотоники. Метод лазерной сканирующей микроскопии, позволяющий получать изображения слаборассеивающих флуоресцирующих объектов с субмикронным разрешением, представляет собой мощный и постоянно совершенствующийся инструмент для решения задач фундаментальной и прикладной биологии.

На оборудовании лазерной сканирующей микроскопии ИПФ РАН в сотрудничестве с ННГУ, НижГМА, ИБХ РАН и ИХФ РАН проводит in vitro исследования взаимодействия флуоресцирующих наноагентов и фармпрепаратов с биологическими клетками (Е. А. Сергеева). В их числе – контроль доставки фармпрепарата в таргетные клетки, изучение динамики накопления и субклеточной локализации флуоресцирующего агента при активной или пассивной доставке, тестирование новых генетических сенсоров на основе цветных флуоресцирующих белков. Эта задача является подготовительной по отношению к этапу экспериментальной онкологии, выполняемому in vivo.

Комплекс LSM 510 META NLO оснащен импульсным фемтосекундным лазером, перестраиваемым по длине волны в ближнем ИК-диапазоне, что позволяет реализовать многофотонное возбуждение флуорофора и существенно увеличить глубину визуализации даже в рассеивающих образцах биологических тканей (до 300–500 мкм с субмикронным разрешением). Кроме этого, существует возможность наблюдать структуру неокрашенных коллагенсодержащих биологических объектов благодаря нелинейной генерации второй гармоники высокоинтенсивного излучения фемтосекундного источника на таких структурах. В настоящее время метод генерации второй гармоники используется в исследовании объемных повреждений сетки коллагена в результате механических, радиационных и опухолевых процессов, выполняемом совместно с НижГМА и МГУ.